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      Altogen Biosystems轉染試劑的相關知識普及

      2019-09-17      點擊:573
        隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷深入,DNA轉染已經成為研究和控制真核細胞基因功能的常規實驗工具。質粒轉染在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生命科學前沿研究中,應用越來越廣泛。Altogen Biosystems轉染試劑能夠利用不同的載體物質攜帶質粒DNA,通過直接穿膜或膜融合的方法,將外源DNA分子導入真核細胞,使外源基因表達,從而針對某個基因和蛋白質的功能進行一系列生物學功能研究的方法。
        轉染效率的確定,常用的是使用熒光定量PCR、熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測等方法。標準無疑是檢測目標基因的mRNA水平,因為轉染試劑不僅要把質粒DNA轉染進入細胞,還應及時把轉入細胞的DNA釋放出來,發揮基因表達或基因調控的作用。通過熒光顯微鏡判斷轉染效率至少存在兩方面的問題:1、熒光顯微鏡看到的熒光點可能是非特異吸附的結果;2、有些轉染試劑能夠將質粒DNA轉染入細胞,但不能充分釋放,導致基因表達或基因調控效率并不高。因而,判斷Altogen Biosystems轉染試劑轉染效率的金標準應該是熒光定量檢測mRNA水平,僅靠觀察熒光顯微鏡判斷轉染效率、選擇轉染試劑往往會導致誤判,影響實驗的進展。
        質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內毒素質粒。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。
        細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。
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